1. 总RNA提取与质检2. 已知序列的验证3. 合成5'和3' RACE-ready cDNA第一链；通过LD-PCR分别进行5' 和3' RACE4. 基因未知序列验证

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用HRM方法检测MGMT启动子区域内的甲基化，可检测低达0.1的甲基化程度；并根据已知甲基化程度的标准曲线对未知样品的甲基化百分比进行测定。HRM是一种高灵敏度的甲基化检测方法，并且其高度的重复性和低成本将对肿瘤的研究和临床应用有很大帮助。

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甲基化特异性的PCR是一种灵敏度高且操作相对简单的甲基化研究方法。重亚硫酸盐处理DNA后，基因组DNA发生的由甲基化状态决定的序列改变。随后进行引物特异性的PCR。该方法引物设计是关键。MSP中设计两

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启动子序列缺失突变分析；转录因子的活性检测；信号通路的研究；药物筛选。

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